2.4 PCI2细胞中的朝鲜ROS水平及MDA含量ROS主要来源于损伤的线粒体,当细胞内产生过量的蓟茎经细ROS或体内氧化剂含量超过细胞的抗氧化应答能力时,细胞就会产生氧化应激。叶中本试验以DCFH-DA作为荧光探针,脂溶作用检测2’,性提7’-二氯荧光素(DCF)的取物荧光强度即可获知细胞内ROS的水平。与空白对照组相比,对神90μmol/LH202处理PCI2细胞4h后,胞的保护细胞内ROS水平显著增加(P<0.01),朝鲜达到460.43%(图4a),蓟茎经细使细胞产生严重的叶中氧化损伤;经脂溶性提取物预处理后,能够显著地抑制PCI2细胞内ROS的脂溶作用产生(P<0.01),其中2mg/L脂溶性提取物预处理细胞8h后,性提ROS含量为208.37%。取物荧光显微镜观察染色后的对神PCI2细胞发现,细胞呈现的荧光强度变化与细胞内ROS水平变化趋势一致(图4b)。因此,脂溶性提取物可以有效地清除ROS,缓解H202引发的线粒体功能障碍。 当动物或植物体产生氧化应激时,会发生脂质氧化,而MDA是一种生物体脂质氧化的天然产物,可以用来确定脂质氧化水平。与空白对照组相比,90μmol/LH202处理PCI2细胞4h后,MDA含量显著增多(P<0.01),达到192.98%(图5);经脂溶性提取物预处理8h后,能够显著地阻止MDA的产生(P<0.01);而正常细胞经脂溶性提取物处理后,在无H202伤害的情况下,其MDA含量可降低至25.71%。 2.5 脂溶性提取物对PCI2细胞凋亡的影响为了进一步探究脂溶性提取物能否有效地抑制细胞凋亡,利用AnnexinV-FITC/PI进行染色,经流式细胞术检测细胞凋亡率(图6a)。如图6b所示,与空白对照组(8.14%)相比,H202处理显著增加了细胞凋亡率(23.66%),经朝鲜蓟脂溶性提取物预处理后,PCI2细胞的凋亡得到显著抑制。其中,经过2mg/L脂溶性提取物预保护后,细胞凋亡率降低至8.75%。 为了更加直观地比较不同处理组的细胞凋亡情况,利用A0-EB对细胞进行染色,通过荧光显微镜观察细胞形态。如图6c所示,空白对照组的细胞因为吖啶橙(A0)透过其完整的细胞膜嵌入DNA,几乎全部呈现绿色荧光,细胞形态正常。没有明显的凋亡相关形态学改变;经H202处理的模型组的细胞发生了边缘化、核凝集等发绿色荧光的早期凋亡现象,并且因为溴化乙锭(EB)透过其破损的细胞膜嵌入DNA,呈现出橘黄色荧光的晚期凋亡现象:而经过朝鲜蓟脂溶性提取物预处理的PCI2细胞呈现出早期凋亡和晚期凋亡细胞皆有减少的现象,并呈现质量浓度依赖性。 3 结论本试验探究了朝鲜蓟副产物中脂溶性提取物对PCI2神经细胞的保护作用。利用GC-MS对朝鲜蓟副产物中萜类及甾醇类化合物进行定性与定量分析,结果表明,主要含有3种倍半萜内脂,2种甾醇及8种五环三萜。试验以H202作为氧化损伤诱导剂,探究朝鲜蓟副产物脂溶性提取物的生理活性,发现该提取物可降低PCI2神经细胞的氧化损伤,并且伴随细胞内LDH漏出率、MDA含量及ROS水平的降低。经过AnnexinV-FITC/PI双染及A0-EB双染后发现,经脂溶性提取物处理的PCI2细胞凋亡率显著降低,与荧光显微镜的观察结果一致。综上,朝鲜蓟副产物脂溶性提取物对PCI2神经细胞具有抗凋亡及保护作用,值得进一步的开发利用与研究。 声明:本文所用图片、文字来源《中国食品学报》,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系 相关链接:朝鲜蓟,脂溶性,2’,7’-二氯荧光素 |
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